(ИФА) - это способ исследования крови в лаборатории, основанный на поиске специальных клеток - антител к различным заболеваниям. Метод позволяет не только выявить возбудителя, но и установить, на какой стадии находится патологический процесс. Последнее очень важно для прогноза и дальнейшего лечения пациента.

Преимущества и недостатки метода

Среди всех современных методов диагностики ИФА является самым инновационным и технически точным. Его основными преимуществами являются:

1. Способность поиска всех существующих антител к инфекционным заболеваниям в крови пациента.
2. Высокая доступность метода исследования. На сегодняшний день анализы методом ИФА может выполнить любая лаборатория среднего масштаба.
3. Практически 100% специфичность и чувствительность метода.
4. Возможность поиска антител и антигенов, а также установление стадии патологического процесса и отслеживание его динамики, благодаря сравнению количества.

Такое количество преимуществ перед другими анализами полностью затмевает один-единственный недостаток анализа: он способен выявлять антитела, но не самого возбудителя.

Основные термины для оценки анализа

Для того чтобы разобраться в том, какой бывает ИФА-анализ, что это такое и как выполняется, нужно познакомиться с основными терминами, применяемыми специалистами.

1. Антитело - белок, который вырабатывается клетками иммунной системы человека (лимфоциты типа В). Они отвечают специфической реакцией на попадание в организм чужеродного агента или вещества. Другое название антител - иммуноглобулины, они принадлежат к разным классам: A, E, M, G. Они отличаются друг от друга массой, скоростью реагирования, периодом полураспада и рядом других характеристик. В норме кровь человека содержит в основном иммуноглобулины класса G. Если происходит какое-либо инфицирование, то резко увеличивается количество иммуноглобулинов A и M. Иммуноглобулины E принимают участие в аллергических реакциях.
2. Антиген - чужеродный агент, имеющий органическое происхождение и высокую молекулярную массу. Чаще всего представляет собой возбудителей или их биологически активные вещества.
3. Комплекс "антиген-антитело", или иммунный комплекс, - это непосредственно комбинация чужеродного вещества и иммуноглобулина, дающая развитие иммунной реакции.

Суть и область применения метода

У пациентов зачастую возникает вопрос: ИФА-анализ, что это такое, как выполняется и для чего он нужен? Доступно о методе можно рассказать, описав вкратце его стадии.

Подготовительная стадия . Врач лаборатории использует специальный планшет, в котором 96 лунок. На поверхность каждой лунки нанесен антиген определенного возбудителя.

Стадия 1. Выполняется забор крови, которая затем по капле наносится на лунку. В лунке запускается реакция между антигеном и антителом в крови.

Стадия 2. В лунке полным ходом идет реакция с образованием иммунных комплексов. В результате образуется вещество определенного цвета. Интенсивность окраски зависит от количества антител в крови пациента к каждому конкретному возбудителю.

Стадия 3. Оценка результата путем фотометрии. Для этого применяется специальный прибор под названием "спектрофотометр". С его помощью сравнивается плотность материала в лунке и контрольного образца. Далее прибор путем математического анализа генерирует результат.

Оценка результатов и предназначение ИФА

Интерпретация результата зависит от нескольких важных нюансов:

1. Оптической плотности лунки.
2. Производителя пластины с лунками (тест-системы).
3. Лаборатории, в которой выполнялось исследование.

Учитывая эти нюансы, никогда не следует сравнивать два результата с разных тест-систем или из разных лабораторий.

Еще одним немаловажным моментом, влияющим на анализ ИФА, является так называемая авидность антител. Этот параметр характеризует количество антигена, прочность связи в комплексе "антиген-антитело". В основе его определения лежит обработка иммуннокомплекса мочевиной с целью разрешения белковых структур. Это позволяет разрушить слабые связи между антигеном и антителом и оставить только прочные. Значение исследования на авидность заключается в том, что с его помощью можно узнать срок инфицирования. Эта информация чрезвычайно важна для постановки диагноза беременным женщинам.

Анализ крови методом ИФА служит:

1. Для поиска различных антигенов возбудителей.
2. Для исследования гормонального фона.
3. Для обследования на наличие аутоиммунной патологии.
4. Для обнаружения маркеров онкологических заболеваний.

Разновидности ИФА

Анализ ИФА имеет следующие разновидности:

1. Непрямой.
2. Прямой.
3. Конкурентный.
4. Метод блокирования.

Но на деле сегодня применяется только способ под названием ELISA (enzyme linked immunosorbent assay). В его основе лежит вышеописанная реакция образования комплекса антигена с антителом с изменением окраски на поверхности лунки.

Отдельного внимания заслуживает непосредственно количественный ИФА-анализ крови. Это не разновидность анализа, а способ оценки результатов. Благодаря ему подсчитывается количество антител и определяются их классы. Результат зависит от оптической плотности пробы, тест-системы, на которой выполнялся анализ ИФА, а также от лаборатории.

Заболевания, выявляемые ИФА

ИФА - анализ крови, позволяющий выявить огромное количество различных инфекционных заболеваний. Притом с одинаковой точностью выявляются как вирусные, так и бактериальные заболевания. Например, с помощью образования иммуннокомплексов можно доказать наличие антигенов возбудителей следующих заболеваний:

Кроме того, ИФА позволяет обнаружить:

1. Маркеры онкологических заболеваний - ФНО (фактор некроза опухоли), ПСА (простатспецифический антиген), РЭА (раково-эмбриональный антиген), СА-125 (маркер опухолей яичников)
2. Гормон беременности — ХГЧ (хорионический гонадотропин).
3. Нарушения репродуктивной системы: гормоны женской и мужской половой систем.
4. Патологию щитовидной железы.

Важно упомянуть, что анализ ИФА на ВИЧ сегодня является главным способом диагностики этого опасного заболевания.

Материал для ИФА и техника забора

Для выполнения ИФА у пациента производится забор крови натощак. Далее из крови получают сыворотку, которая непосредственно используется для проведения анализа. Кроме того, ИФА можно проводить на спинномозговой жидкости (ликворе), слизи цервикального канала (шейки матки), околоплодных водах и даже жидкости стекловидного тела (глазного яблока).

Перед сдачей крови пациента предупреждают о том, что он не должен принимать никаких лекарственных препаратов, а лечение антибиотиками и противовирусными препаратами рекомендуется заканчивать не менее чем за две недели до забора крови.

Сроки получения и расшифровка результатов

Сроки получения ответа из лаборатории зависит не от скорости ее работы, а от того, на какой стадии находится заболевание и какие антитела уже появились в крови. Так, к примеру: иммуноглобулины М появляются примерно через 2 недели после взятия крови на анализ и означают, что процесс находится на стадии первичного инфицирования или произошло обострение хронического. Одновременно антитела классов M и G появляются при первичной инфекции. Притом последние могут обнаруживаться спустя 4 недели.

IgA появляются спустя 2-3 недели либо в одиночку, либо вместе с М, означая острую инфекцию, или вместе с G, указывая на хронический процесс.

Такие разные сроки появления антител в крови заставят пациента долго ожидать результата. Допустимо ожидание более месяца после того, как выполнен анализ ИФА. Расшифровка и интерпретация врачом также занимают определенный промежуток времени.

Лабораторные анализы помогают врачам не только выявить заболевание, но и определить способность организма противостоять инфекциям. Кроме того, некоторые позволяют установить и стадию патологии. Примером такого исследования является ИФА, который часто используется в диагностике.

Метод ИФА – что это такое?

Иммуноферментный анализ (ИФА) – лабораторное исследование, направленное на выявление в образце крови специфических антител белковой природы к определенным антигенам. Первостепенное значение среди множества антител имеют иммуноглобулины, которые способны существовать в составе иммунокомплексов. Синтезируются они в организме в результате нейрогуморальных реакций иммунной системы после внедрения в организм патогенного агента.

На каждый вид патогенных клеток вырабатываются свои антитела – в качестве ответной реакций. Подробная их диагностика и анализ помогают определить непосредственно тип патологии, которая может присутствовать в организме человека, не проявляя себя. Твердофазный иммуноферментный анализ выявляет скрытые, вялотекущие патологические процессы, определяет их стадию.

Что показывает анализ ИФА?

Разобравшись с тем, что обозначают термином анализ ИФА, что это такое, необходимо отметить основное диагностическое значение исследования. Данный метод используется для определения присутствия в образце крови антигенов возбудителя инфекции и антител, которые являются результатом активации иммунной системы. Среди важных классов антител необходимо выделить IgA, IgM, IgG.

Иммуноферментный анализ крови назначается при необходимости дифференциальной диагностики, постановки окончательного диагноза. Он помогает врачам выявить скрытые патологии. Кроме того, назначаться ИФА может и для оценки уровня иммунной реакции после проведения накануне вакцинации. В большинстве случаев анализ ИФА (что это такое, описано выше) назначается при наличии подозрений на следующие типы патологий:

• гепатит;
• ветряная оспа;
• гельминтозы;
• краснуха;
• полиомиелит;
• герпес;

Кроме того, ИФА на определенные типы иммуноглобулинов может проводиться и при:

• ревматоидном артрите;
• сепсисе;
• хронических гнойных отитах;
• пневмонии;
• менингите;
• синусите;

Как проводится иммуноферментный анализ?

Иммуноферментный анализ, ИФА, проводится путем исследования образца забранной крови. На поверхность предварительно подготовленной специальной планшетки помещают небольшое количество сыворотки крови и очищенного антигена. Соединяя их, наблюдают за происхождением реакции в микроскоп. Антиген и антитело одного вида образует комплекс. Для диагностики его образования проводят дополнительное окрашивание. По интенсивности произошедшего окрашивания делают выводы относительно концентрации иммуноглобулинов в образце сыворотки крови пациента.

Анализ методом ИФА (что это такое, вы уже знаете) чувствителен даже к небольшому количеству иммуноглобулинов, обладает высокой специфичностью. В результате врачи могут с его помощью проводить точную дифференциальную диагностику заболеваний со схожей клинической картиной. Сама процедура анализа длится недолго, поэтому результат исследования можно узнать в тот же день. При необходимости срочной диагностики получить ответ можно спустя 2–3 часа с момента забора крови.

Иммуноферментный анализ крови – подготовка

Метод иммуноферментного анализа перед его проведением требует от пациента некоторой подготовки. В качестве исследуемого материала выступает венозная кровь. Забор ее осуществляется исключительно в утренние часы, натощак. Перед прохождением процедуры пациенту требуется избегать эмоциональных перегрузок, стрессовых ситуаций, исключить физические нагрузки. Для получения объективных результатов исследования перед тем, как сдавать анализ ИФА на хламидии и другие инфекции необходимо:

1. За сутки до анализа из рациона исключают жирные блюда, копчености и алкоголь.
2. Перед исследованием не курить.
3. Последний прием пищи должен происходить накануне анализа с интервалом не менее 8 часов до предполагаемого времени исследования.

Иммуноферментный анализ – забор материала

Анализ методом ИФА предполагает забор венозной крови в качестве биоматериала для исследования. Осуществляется процедура в условиях лаборатории. Из локтевой вены с помощью одноразового шприца забирается образец крови в объеме 5–10 мл. Нередко используют специальные вакуумные пробирки, после подсоединения к которым иглы кровь самостоятельно заполняет емкость. Полученный образец маркируется соответствующим образом и отправляется для дальнейшего обследования. Чаще результат исследования известен на следующий день.

Анализ крови ИФА – расшифровка

Расшифровка анализа ИФА проводится исключительно специалистом. При этом учитываются результаты других исследований, проведенных накануне. Стоит отметить, что ИФА имеет две модификации – качественную и количественную оценку. Положительный результат качественной оценки ИФА свидетельствует о наличии в организме антител к определенному типу возбудителя. В дальнейшем назначается количественная оценка, которая направлена на установление степени болезни, стадии. При отрицательном анализе говорят об отсутствии патогенов в организме малыша.

Анализ ИФА отрицательный

Отрицательный результат анализа не всегда указывает на отсутствие патологии. Так, анализ ИФА на сифилис может быть отрицательным в стадии ремиссии, когда патоген а организме находится в малой концентрации после проведенного курса терапии. Учитывая этот вариант, врачи проводят дополнительное исследование спустя некоторое время. Кроме того, отрицательный результат может наблюдаться и после недавнего инфицирования, когда антитела еще не выработались организмом в диагностической концентрации.

Анализ крови ИФА положительный

При положительном результате анализа проводится определение титра антител, их класса. В большинстве случаев для диагностики инфекционных процессов определяют концентрацию IgG и IgM. Образуются они в разное время.

– современное лабораторное исследование, в ходе которого ведется поиск специфических антител в крови либо антигенов к конкретным заболеваниям с целью выявления не только этиологии, но и стадии болезни. Результаты ИФА могут выдаваться качественно и количественно.

В настоящее время ИФА применяется в следующих ситуациях:

1) Поиск специфических антител к любому инфекционному заболеванию;
2) поиск антигенов каких-либо заболеваний (инфекционных, венерологических);
3) исследование гормонального статуса пациента;
4) обследование на онкомаркеры;
5) обследование на предмет наличия аутоиммунных заболеваний.

Преимущества метода ИФА:

1) Высокая специфичность и чувствительность метода ИФА (более 90%).
2) Возможность определения заболевания и отслеживания динамики процесса, то есть сравнивание количества антител в разных временных промежутках.
3) Доступность ИФА-диагностики в любом медицинском учреждении.

Относительный недостаток:

1) Выявление иммунного ответа (антител), но не самого возбудителя.

Основные понятия

Перед тем, как прояснить суть метода ИФА, кратко разберемся в некоторых понятиях.
Антитела (или иммуноглобулины - Ig) – специфические белки, вырабатываемые B -
лимфоцитами (иммунные клетки) в ответ на попадание в организм какого-либо инфекционного патогена (вирусы, бактерии, грибы и др). Выделяют иммуноглобулины А (IgA), иммуноглобулины Е (IgE), иммуноглобулины М (IgM), иммуноглобулины G (IgG), иммуноглобулины D (IgD). Отличаются они друг от друга молекулярной формой и массой, периодом полураспада, участием/неучастием в инфекционных процессах, сроками обнаружения с момента инфицирования. Если рассмотреть молекулярный вес, то больше всего он у IgM – это пентамер (950 000 дальтон) в отличие от остальных Ig (от 150 до 200 000 Да), благодаря чему IgM просто не могут проходить через плацентарный барьер. Поэтому обнаружение IgM у ребенка 1 года жизни всегда является признаком наличия инфекции у плода. В сыворотке крови основная масса иммуноглобулинов представлена именно IgG (75-85%), а самая низкая - IgE (0,003%). В инфекционном процессе непосредственное участие принимают только IgA, M, G. IgE являются признаком аллергических реакций и заболеваний, а IgD – можно обнаружить лишь в ткани лимфоузлов и миндалин, играет роль в формировании местного иммунитета.

Антигены – высокомолекулярные вещества органического происхождения, в частности возбудителей инфекционных и других заболеваний, а также вещества различных измененных клеток, образующихся при той или иной болезни (аутоиммунные заболевания, онкология).

Иммунный комплекс – комплекс антиген-антитело, участвующий в иммунном процессе.

На чем основан метод ИФА.

Выделяют несколько разновидностей ИФА (прямой, непрямой, метод блокирования, конкурентный), однако на практике чаще всего используется гетерогенный твердофазный иммунный анализ или ELISA (enzyme linked immunosorbent assay)

Основу иммуноферментного анализа составляет иммунная реакция антигена и антитела с образованием иммунного комплекса: антиген-антитело, в результате которого происходит изменение ферментативной активности специфических меток на поверхности антител.

Простым языком этот процесс можно разделить на несколько этапов:

1) На поверхности лунок планшета доктора, проводящего обследование, находится очищенный антиген определенного возбудителя. При добавлении биологического материала (сыворотки крови) пациента происходит специфическая реакция между этим антигеном и искомым антителом (иммуноглобулином). Это соединение будет выступать «особым антигеном» в следующем этапе.

2) На данном этапе идет образование ИК (иммунных комплексов) - реакция между «особым антигеном» и конъюгатом (это иммуноглобулин, меченый ферментом пероксидазой). Добавляется особый хромоген. Результатом такой ферментативной реакции является образование окрашенного вещества в лунке планшета, интенсивность окраски которого зависит от количества содержащихся в материале пациента иммуноглобулинов (антител).

3) Далее происходит оценка результата: фотометрирование с помощью многоканального спектрофотометра, сравнение оптической плотности исследуемого материала с оптической плотностью контрольных проб, математическая обработка результатов. Количество антител у пациента напрямую зависит от высоты оптической плотности данной лунки.

Обычно на практике используют 96 луночные планшеты.

При измерении оптической плотности (ОП) исследуемой жидкости подсчитывается количество (или концентрация) антител в определенной единице объема. Затем результат сравнивается с контрольным образцом.

Нужно помнить: для каждой тест-системы разрабатываются индивидуальные показатели для учета результатов, показатели нормы и патологии (то есть «референтные значения»). Это нужно учитывать при оценке результатов каждого конкретного исследования. Некорректно интерпретировать результаты одной лаборатории по «референтным значениям» другой лаборатории. Также некорректно сравнивать результаты разных лабораторий между собой.

При постановке реакций ИФА имеет значение и такое понятие как авидность антител.
Авидность антител – это прочность связи антитела с антигеном и то количество антигена, находящегося во взаимосвязи с иммноглобулинами (антителами). Авидность имеет большое значение при оценке предполагаемого срока инфицирования, что чрезвычайно важно при диагностике первичного инфицирования у беременных.

Основа теста на авидность антител состоит из обработки иммунного комплекса (антиген-антитело) раствором мочевины с целью разрушения белка. Высокоавидные связи остаются целыми, а низкоавидные разрушаются. Результат выдается в виде индекса авидности, выражаемого в процентах (%).

Какие заболевания выявляются с помощью ИФА-диагностики?

2. Маркеры аутоиммунных заболеваний и показатели иммунитета человека (общий IgE, общий IgG, общий IgA, общий IgM, общий IgD, секреторный IgA, IgG 2, IgG4, ЦИК-циркулирующие иммунные комплексы, IgA и IgG к глиадину и другие)

3. Онкологичсекие маркеры (ФНО – фактор некроза опухоли, РЭА – раково-эмбриональный антиген, ПСА – простатспецифический антиген, ХГ – хорионический гонадотропин, СА 125, альвеомуцин и многие другие)

4. Репродуктивные нарушени я (эстрадиол, прогестерон, пролактин, тестостерон, АФП- альфафетопротеин, ФСГ – фолликулостимулирующий гормон и другие)

5. Заболевания щитовидной железы (свободные и связанные Т3, Т4, тиреоглобулин, тиреопероксидаза – ТПО, тиреотропный гормон - ТТГ).

Данный список представлен далеко не всеми заболеваниями, которые диагностируются с помощью иммуноферментного анализа.

Материал для ИФА анализа и правила его забора

Наиболее распространенный материал для реакции ИФА – это сыворотка крови пациента, взятая натощак. Материалом также могут служить спинномозговая жидкость, околоплодные воды, содержимое стекловидного тела, слизь цервикального канала и уретры, мазки.

Подготовка пациентов к сдаче материала для ИФА

Сроки изготовления ИФА

Иммуноферментный анализ материала проводится быстро, в течение суток. Задержки могут быть в разных лабораториях из-за накопления определенного количества сывороток.

Возможные результаты ИФА-диагностики

При оценке результатов на конкретные инфекции имеет значение класс обнаруженных антител и их количество. От этого зависит не только вопрос этиологии инфекции (есть она или нет), но и предполагаемая стадия заболевания (острая, хроническая), а также наличие активной инфекции (острой или обострения хронической) на момент обследования.

Каковы приблизительные сроки появления антител (иммуноглобулинов - Ig)?

Самыми ранними антителами являются IgM . Выявить их можно через 1-3 недели после возможного инфицирования, что характеризует острую фазу инфекционного процесса. Вторая ситуация появления антител IgM – активация (или обострение) хронического процесса. Антитела IgM циркулируют в среднем около 3х месяцев, затем их количество постепенно исчезает. Однако у некоторых пациентов следовые количества IgM могут обнаруживаться в течение 1-2х лет с момента инфицирования.

Современные тест-системы обладают высокой чувствительностью, вследствие чего встречаются неспецифические ложноположительные результаты (нередко у беременных). Поэтому у данной группы пациентов положительные IgM нужно перепроверять!

Антитела IgA появляются через 2-4 недели после инфицирования, но в количестве, достаточном для обнаружения – через месяц. Сывороточные IgA синтезируются плазматическими клетками селезенки, лимфоузлов и слизистых оболочек,Секреторные IgA концентрируются на слизистых оболочках для выполнения своей защитной функции – участвуют в местном иммунитете.

С 4й недели после инфицирования начинают появляться антитела IgG . При большинстве инфекций титр их постепенно увеличивается с максимумом в разные сроки (в среднем через 1,5-2 мес), далее титр остается на невысоком уровне и указывает на иммунитет. При некоторых заболеваниях (микоплазмоз, хламидиоз, трихомониаз) уровень IgG не бывает высоким, снижается существенно из-за отсутствия иммунитета при данных инфекциях.

Варианты обнаружения антител разных классов:

Изолированное обнаружение антител IgM предполагает наличие первичного
инфицирования.
- Одновременное выявление в крови IgM и IgG характерно для первичного инфицирования
в предыдущие 2-3 месяца, а также при обострении хронического заболевания. Следовательно, при беременности наличие IgM не всегда является признаком первичного инфицирования.
- Выявление изолированно IgG может указывать как на иммунитет к данному заболеванию,
так и на хроническую инфекцию. Во второй ситуации имеет значение и количество антител (титр), и изменение этого титра в динамике. Обычно исследования проводят с интервалом в 2-4-6 недель.
- Обнаружение IgA изолировано или с IgM указывают на первичную инфекцию. При
появлении IgA вместе с IgG предполагается активация хронической инфекции (в среднем 2 недели от момента обострения).

Определение авидности антител IgG является прекрасным дополняющим этапом диагностики первичной инфекции от давнего заражения, что имеет свое клиническое значение, прежде всего, при оценке риска внутриутробного заражения плода. Обнаружение низкоавидных IgG указывает на первичную инфекцию и выявляются в среднем спустя 4-6 месяцев после инфицирования, реже дольше. Низкоавидные IgG требуют других лабораторных подтверждений первичного инфицирования (IgM). Высокоавидные антитела являются либо признаком хронического заболевания и его обострения, либо сформировавшегося иммунитета.

Особенности у детей грудного возраста: у детей до года, а иногда и 1,5 лет в крови циркулируют материнские IgG к разным инфекциям (то есть произошло их проникновение через плаценты от матери к плоду в период внутриутробного развития). Она не являются сами по себе признаком наличия инфекции в настоящем. Если же в такjм возрасте обнаруживаются IgM (напомним, что материнские IgM проникнуть через плаценту не могут), то это признак внутриутробного инфицирования или приобретенной после рождения инфекции.

Количественный ИФА-метод

Результат ИФА-диагностики (с помощью иммуноферментного анализатора) выдается в определенных единицах измерения:
- Оптическая плотность (ОП) пробы – концентрация специфических антител в единице объема. Чем выше ОП пробы, тем выше концентрация антител. В некоторых результатах говорится о коэффициенте позитивности (КП) – это тоже оптическая плотность образца.
- Единицы концентрации антител (нанограмм/ миллилитр или нг/мл).
- В виде титров сывороток: 1:20, 1:40, 1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1:1200 и так далее. Диагностические титры (при которых ставится диагноз именно болезни, а не факт инфицирования) для разных болезней разные.
- В виде символов – «+», «-», «?» (+, ++, +++, ++++).
- В виде качественной оценки по заданному критерию (положительно или отрицательно).

Правильно оценить количество антител, вариант классового выявления иммуноглобулинов, а, следовательно, выставить стадию болезни и необходимость лечения может только врач.

Нельзя забывать, что для любой тест-системы разрабатываются свои «референтные значения» (варианты нормы), при превышении которых и диагностируется то или иное заболевание (варианты патологии). Для разных тест-систем «референтные значения» различные.

Корректное сравнивание результатов ИФА, взятых в динамике, возможно только в случае их изготовления в одной и той же лаборатории.

Врач инфекционист Быкова Н.И.

Благодаря развитию современной медицины, врачу при постановке диагноза больше не нужно ориентироваться на косвенные проявления заболеваний или проводить многоступенчатые лабораторные исследования. Достаточно провести один анализ, который подтвердит или опровергнет предполагаемый первоначальный диагноз.

Таким методом является иммуноферментный анализ (ИФА) — это исследование позволяет обнаружить специфические антитела и антигенны свойственные при разнообразных патологиях, что во многом ускоряет установку диагноза.

ИФА анализ — это такоелабораторное исследование (метод), которое помогает определить присутствие или отсутствие определённых антител в организме для борьбы с вирусом и их количество.

Основой исследования является естественная реакция антиген (вредоносный организму объект) – антитело (белок уничтожающий вредоносные объекты), позволяющая выявить присутствие разнообразных вирусов, бактерий.

ИФА представляет собой естественный иммунный ответ организма – взаимодействие антитела с соответствующим антигеном. Так во время ИФА в пробирку с материалом добавляются поочередно антигены или антитела, после чего происходит выявление концентрации получившихся комплексов антиген-антитело.

Если совпадения образовались, то возникают иммунные комплексы, далее происходит ферментная реакция красящего вещества с объединённой молекулой. Именно благодаря изменению цвета в ходе ферментативной индикации происходит идентификация заболевания после исследования уровня определяемого соединения.

Виды иммуноглобулинов

Иммуноглобулины человека дифференцируются на несколько классов, отличающихся друг от друга свойствами, структурой и антигенными особенностями тяжелых цепей (Н-цепи). У всех млекопитающих, в том числе и человека, выделяют пять Н-цепей, которые и определяют принадлежность иммуноглобулинов к соответствующему классу: G, М, A, D, Е.

Каждый класс отличается друг от друга биологическими свойствами, и способностями связывать антигены, и скоростью и прочностью связи с молекулой.

Функции каждых иммуноглобулинов (lg) различны:

	Кол-во в организме	Функции	Период полураспада (дней)	Значение
G	70%	Формируют пассивный иммунитет у новорожденного; необходимы для иммунного ответа улучшают фагоцитоз,	21-24	обеспечивают длительный гуморальный иммунитет при инфекционных заболеваниях
М	5-10%	нужны для активации фагоцитоза, способны связать 5 молекул антигена,	5	Обеспечивает первичную иммунную реакцию
А	10-15	Нейтрализуют токсины и вирусы нужны для формирования раннего иммунитета Возникновение иммуноглобулинов происходит по своеобразной «цепочке» — lgM lgG, именно так реагирует организм на появление в организме антигена. Во время лабораторной диагностики проводится оценка концентрации трех основных иммуноглобулинов – G, M, A. Показания к сдаче анализа на иммуноглобулины ИФА-анализ с каждым годом становится все более популярным. Такое исследование ускоряет постановку диагноза, а это очень важно для терапии таких патологий как: вирусный гепатит; ВИЧ-инфекция; цитомегаловирус, вирус Эпштейна-Барр, вирус герпеса, краснуха, туберкулез, сальмонеллёз, дизентерия, клещевой энцефалит, бактерии хеликобактер, боррелиоз, столбняк, сифилис, дифтерия, лептоспироз, хламидиоза, уреаплазмоз, микоплазмоз, коклюш. плоскими червями аскаридами гистолическими амебами, печеночными тремадами, лямблиями, токсоплазмами, трихинеллами, двуусткой, цестодозами. ИФА является своеобразным маркером аутоиммунных патологий и злокачественных новообразований. Подготовка к сдаче анализа При подготовке к исследованию следует придерживаться таких правил: Так же врачи рекомендуют придерживаться специальной диеты – исключить жирную и жареную пищу, а если исследование проводится на гепатиты, то необходимо не употреблять любые оранжевые овощи и особенно цитрусовые. Сдавать кровь следует с утра на голодный желудок. Ложноположительным анализ бывает из-за невыполненных рекомендаций, особенно употребления жирной пищи, что приводит к слишком большой концентрации триглицеридов в плазме, из-за чего проводимость ИФА снижается. Порядок взятия пробы В качестве исследуемого материала может использоваться цельная кровь, сыворотка или плазма венозной крови. Забор материала, обычно проводится из локтевой вены, для этого применяется одноразовая игла и вакуумная пробирка, необходимо 5-10 мл крови. Для точности результата важно придерживаться правильной техники взятия пробы – прокол самого сосуда и окружающих тканей должен быть произведен одной манипуляцией, поэтому используется короткая игла с большим диаметром, благодаря чему не травмируется противоположная стенка вены и не повреждаются эритроциты. Так же для сохранения целостности эритроцитов, нужно чтобы кровь стекала по стенкам пробирки. Во время хранения материала следует избегать возможной его ионизации, кроме того материал не должен контактировать с остатками дезинфицирующих средств, поэтому используется только одноразовая пластиковая пробирка, с маркировкой ФИО пациента, датой и временем сдачи материала. Если необходимо непродолжительное хранение исследуемого материала, то используется холодильная камера с температурой 2-4 о С, если необходимо более продолжительное хранение, то материал замораживается при температуре -20 о С. Как делают анализ После подготовки исследуемого материала врач-лаборант приступает к необходимым манипуляциям. Для этого используются ряд специальных наборов антигенов, обдающих свойством спровоцировать ответные реакции организма на раздражитель, это разнообразные инфекции, гормоны, аллергены. Схема ожидаемой реакции «антиген-антитело» выглядит приблизительно так: Первичная реакция — определяемый Ig (Ab) и очищенный антиген возбудителя (Ag). Для обнаружения получившихся иммунных комплексов далее следует новая иммунологическая реакция, где антигеном выступает связанный специфический Ig, а антителом для него выступает коньюгат- Ig (Ab). Последний этап — ферментативная реакция, вместе с катализатором молекулой коньюгата. Субстратом выступает хромоген (не окрашенный), который в процессе протекания реакции окрашивается, и интенсивность цвета и определяется количественный показатель иммуноглобулина в пробе. В настоящий момент разработано множество разнообразных вариантов ИФА, четкая классификация их отсутствует. Обычно, методы рассматриваются исходя из разделения её на гетеро- и гомогенные — все фазы анализа происходят с применением твердой фазы или с использованием только раствора. Современные клинико-диагностические лаборатории обычно используют гетерогенный (твердофазный) ИФА, в нем под твердой фазой подразумевается абсорбция антигенов или антител на твердой поверхности специальных лунок, расположенных на полистироловом микропланшете, метод подразделяется на прямой и непрямой ИФА. При прямом ИФА, вносимый антиген закрепляет в период инкубационного процесса на поверхности пустых лунок, для этого исследуемые пробы материал помещают в чистые лунки на 20-25 минут, это нужно для прикрепления антигена к их поверхности. После этого происходит добавление необходимого антитела. Далее материал остается на определенное время для образования связей. Антитела всегда добавляют в избытке, поэтому даже при их наличии в пробе остаются не связанные антигены, а если антигенов нет совсем, то связей не будет. Чтобы удалить«лишние» антитела проводится декантация, после чего остаются только те антитела, которые создали связь с антигеном. После этого следует ферментативная реакции – добавление в лунки раствора с ферментом, после чего происходит окрашивание полученных связей. При непрямом методе ИФА используемые антитела, заранее соединенные с субстратом ферментативной реакции; в этом случае связь антител с антигеном происходит в период инкубационного процесса, после чего происходит мобилизация связей на поверхности лунок, а вносимый после конъюгат и субстратно-хромогенный реагент окрашивают реакцию. Таким образом, главным отличием непрямого от прямого метода является не приклеивание материала к поверхности чистых лунок, а связывание с антигеном, иммобилизованным на планшете. Останавливается протекание реакции с применением специализированных устройств, далее каждая лунка подвергается процессу фотометрирования, за которым следует сравнительная характеристика полученного результата с проведенными ранее контрольными пробами. Если обнаруживается повышение оптической плотности в пробе, то завышена и концентрация специфических антител в исследуемом результате. Когда будет готов анализ Проведение исследования не занимает много времени, от забора крови до получения результата проходит от 1 до 10 дней, в зависимости от диагностических мероприятий. Результаты теста и их расшифровка На полученном пациентом бланке-результате диагностики указывается отрицательный либо положительный результат на определенные классы иммуноглобулинов, так же указывается количественный показатель различных классов антител. Возможны различные интерпретации результатов: IgM (+) (IgA, IgG не определялись) – процесс выздоровления; IgM (-) ;IgG (+), IgA (+) – хроническая инфекционная патология; IgM, IgG, IgA (все с – значением) – отсутствие защитных механизмов к инфекциям; IgG (+/-) и IgA (+/-), IgM (+) – острый процесс; IgM (-), IgA(-),IgG(+) – постинфекционный иммунитет; IgM, IgG, IgA (+) – хроническая патология в стадии обострения. Так, например, если были обнаружены IgG и IgM, то возможно у пациента одно из таких заболеваний: вирусный гепатит; цитомегаловирус; герпес; ветряная оспа; хламидиозом; стафилококковая или стрептококковая инфекция. Иммуноферментный анализ часто назначается при гормональных исследованиях, нормы показаны в таблице: Название гормона Пол Норма 1 тиреоглобулин м/ж До 70 МЕ/мл 2 тироксин м/ж 64-146 нмоль/л 3 трийодтиронин м/ж 1,8-2,8 нмоль/л 4 Свободный тироксин м/ж 11-25 пмоль/л 5 Свободный трийодритонин м/ж 4,49-9,3 пмоль/л 6 Тестостерон, дегидротестостерон Ж 0,5-10 мЕд/л ИФА анализ — это такое диагностическое исследование, которое позволяет оценить вероятность образования онкологических патологий. Однако интерпретация результатов проводится только лечащим врачом. Значение результатов теста ИФА подходит для выявления разнообразных форм половых инфекций, в том числе сифилиса, часто используется и для скрининга беременных. Благодаря этому исследованию можно узнать, как давно произошло заражение и стадия заболевания на момент исследования: иммуноглобулины М говорят о длительности заболевания; IgA — пациент заразился более 30 дней назад; IgG обнаруживается на «пике» заболеваний, или же в тот момент, когда терапия окончилось недавно. В процессе исследования лунки на планшете с отрицательным показателем остаются бесцветные, а положительные окрашиваются в ярко-желтый цвет. Если цвет положительных лунок не совпадает с цветом контроля, то результат считается сомнительным и необходимо повторное исследование. Иммуноферментный анализ — это первая ступень в диагностике ВИЧ. Проводить анализ нельзя сразу же после предполагаемого заражения необходимо дождаться окончания инкубационного периода (от 14 дней до 6 месяцев). В ходе анализа определяются антитела к ВИЧ-1 и ВИЧ-2, происходит поиск АТ класса G, который обычно появляется на более поздних сроках и АТ класса А и М, они могут быть определены на ранних стадиях (во время инкубационного периода). если первый тест дал положительный результат, то кровь вновь перепроверяется другим лаборантом; повторный положительный результат предполагает пересдачу материала, при повторении результата, пациенту назначается иммуноблотинг. Окончательный вывод о наличии ВИЧ-инфекции выдается только после результата иммуноблотинга. ИФА также применяется в качестве диагностического исследования туберкулеза, но если у пациента даже и были выявлены антитела к данной патологии, то это не всегда подтверждает наличие у него туберкулеза, поэтому ИФА часто применяется качестве уточняющей методики, либо же для диагностики скрытой внелегочной формы. IgG- хроническая стадия инвазии
IgA – заражение произошло более 30 дней назад
	IgG – инвазия находится в острой фазе
IgG – подтверждает диагноз и показывает эффективность терапии

Плюсы и минусы анализа

ИФА имеет множество достоинств, что и объясняет его популярность среди врачей и пациентов, это:

• высокая точность результата,
• доступная цена,
• быстрый результат,
• выявление стадии заболевания,
• контроль заболевания в динамике.

Однако наравне с достоинствами существует и недостаток – в редких случаях анализ бывает ложноположительным или ложноотрицательным.

Почему результат может быть недостоверным

Ошибки в результате могут возникать из-за технических нарушений, так же недостоверным анализ бывает у людей с некоторыми хроническими заболеваниями (ревматоидный фактор) для которых характерной является выработка специфических антител.

Так же на конечный результат оказывает влияние употребление пациентов медикаментов и нарушение метаболизма. По данным причинам положительный результат на ВИЧ и онкопатологии требует повторную сдачу проб.

Стоимость исследования

Цена ИФА варьируется в зависимости от направления диагностики (руб.):

• гепатит 250 -900;
• вирусы – 250 -1000;
• ВИЧ – 250-350;
• глистные инвазии – 280 — 900;
• сифилис -150-250;
• грибковые инфекции 400-500.

Оформление статьи: Лозинский Олег

Видео о ИФА анализе

Как выполняется анализ ИФА:

Иммуноферментный анализ крови – одно из важнейших исследований, проводимых для оценки способности организма человека противостоять атаке болезнетворных микроорганизмов. Оно позволяет понять, насколько хорошо иммунная система справляется с инфекционными процессами. Это, в свою очередь, дает возможность скорректировать схему лечения, если таковое проводится.

И это еще далеко не все особенности данного теста, поэтому давайте подробно рассмотрим вопросы, что такое ИФА анализ, кому он показан, как он выполняется, и о чем могут говорить полученные данные.

Что это за исследование

Итак, что это такое – ИФА анализ? Расшифровывается данная аббревиатура как «иммуноферментный анализ». Проводится он в том случае, если необходимо определить наличие антител к разного рода антигенам.

Антигенами называются болезнетворные агенты, способствующие развитию различных патологий. Антитела – вещества, которые необходимы для уничтожения чужеродных клеток.

Иммуноанализ крови направлен на определение уровней иммуноглобулинов, которые могут объединяться в иммунокомплексы. Они активно вырабатываются иммунной системой в ответ на внедрение в организм антигенов.

Примечание. Для борьбы с каждым отдельным видом антигена вырабатываются свои специфические антитела. Именно это помогает выявить болезнь, и даже ее стадию, с помощью иммуноферментного исследования крови.

При проникновении чужеродного антигена в организм человека антитела «связываются» с ним, после чего нейтрализуют его воздействие. Происходит это за счет ферментативного лизиса и реакций фагоцитоза. Благодаря такому процессу антигены выводятся из крови.

Когда назначается тест?

Разобравшись в том, что такое иммуноферментный анализ, разберемся в ситуациях, при которых показано его проведение. Так, исследование необходимо при:

• онкологических заболеваниях;
• вирусных гепатитах;
• герпетических высыпаниях на коже или слизистых оболочках;
• сальмонеллезе;
• кори;
• энцефалите;
• сифилисе;
• дизентерии;
• атопических дерматитах или нетипичных проявлениях аллергических реакций.

Помимо этого, метод ИФА применяется для определения и выявления возбудителей:

• заболеваний, передающихся половым путем;
• цитомегаловирусной инфекции;
• гельминтозов.

Иммуноферментный анализ – это исследование, помогающее определить природу эндокринных заболеваний, а также выявить наличие иммунодефицита и бесплодия у мужчин и женщин. С его помощью составляются прогнозы дальнейшего течения инфарктов, инсультов, неврологических и почечных заболеваний.

Проводится ИФА анализ и в профилактических целях. Обязательно его выполняют при беременности, а также пациентам, ранее перенесшим вышеописанные заболевания. Лица, входящие в группу риска развития ранее упомянутых болезней тоже регулярно сдают кровь на ИФА.

Особенности проведения теста и расшифровка

В большинстве случаев для иммуноферментного исследования берется кровь больного. Но при определенных обстоятельствах может осуществляться забор тканей с поверхности стекловидного тела. У беременных женщин ИФА диагностика может проводиться посредством изучения состава околоплодных вод.

Забор крови выполняется с использованием шприца, при этом материал для исследования берут, как правило, из вены, походящей на внутренней стороне локтевого сгиба. Пациент при этом должен находиться в расслабленном состоянии, в положении сидя.

Важно! Результаты теста, его и расшифровка данных зависит от методики проведения диагностической манипуляции, и используемого при этом оборудования. Как правило, каждая лаборатория указывает на бланке нормы показателей иммуноглобулинов.

Особенности подготовки

Анализ крови на ИФА требует выполнения определенных подготовительных процедур:

• отказа от завтрака в день теста;
• прекращения приема препаратов, разжижающих кровь, и других фармакологических средств, способных повлиять на результаты (после предварительной консультации у лечащего врача);
• воздержания от курения в день исследования;
• отказа от употребления спиртного за день до забора крови;
• исключения приема наркотических веществ (в том числе, и медпрепаратов, которые их содержат).

Соблюдение таких правил подготовки к иммунохимическому анализу крови исключает возможность искажения данных.

Трактовка данных

Результаты исследования выдаются пациенту на руки, после чего он проходит повторную консультацию у специалиста. Расшифровка данных ИФА может быть положительной или отрицательной. При этом в расчет также принимаются цифры, обозначающие (если таковые были обнаружены).

Если ИФА отрицательный, это может говорить об отсутствии патологических процессов, либо о начальной фазе их развития. Также «минусовый» результат исследования наблюдается при выздоровлении пациента после пройденного курса терапии. Но подобные данные можно получить только по истечении определенного промежутка времени (1 – 2 месяцев).

Если и IgM в крови отсутствуют, а анализ ИФ показал положительный результат на , это может свидетельствовать о том, что у пациента сформировался стойкий иммунитет к определенному виду антигенов. Подобное происходит при иммунизации.

При высокой концентрации IgM на фоне отсутствия IgG и IgA речь может идти о воспалительном процессе, протекающем в острой фазе.

Что означает, если ИФА положительный для всех видов иммуноглобулинов? В подобных случаях речь может идти о рецидиве инфекционной патологии. При этом возникновение антител фиксируется только при острой фазе хронической болезни.

При переходе заболевания в фазу затухания будут отрицательными. А вот ИФА на IgG и IgA будет положительным.

Плюсы и минусы теста

Исследование крови методом ИФА имеет свои сильные и слабые стороны. К плюсам можно отнести:

• относительно невысокую стоимость;
• точность;
• возможность регулярного проведения с целью оценки эффективности проводимого лечения;
• быстроту выполнения;
• использование высокоточных и высокоинформативных технологий для получения достоверных результатов;
• возможность проведения множественных исследований в области одного и того же очага патологического процесса;
• абсолютную безболезненность;
• отсутствие любых рисков для здоровья пациента;
• относительную простоту исследования.

Исследование крови ИФА, благодаря вышеописанным преимуществам, приобрело широкую распространенность, и играет немаловажную роль в диагностике различных заболеваний.

Недостатки

Существенным минусом ИФА крови является вероятность получения ложноположительных или ложноотрицательных результатов. Но это связано в большинстве случаев не с самим методом исследования, а с человеческим фактором.

Еще один нюанс, способный повлиять на конечные данные, - применяемые в ходе теста медикаментозные препараты. При их неправильном использовании, либо же в случае брака, расшифровка анализов ИФА будет недостоверной. Следовательно, исследование придется проводить повторно.

Важно! Повлиять на данные теста может нарушение обменных процессов в организме пациента. Помимо этого, на результатах может сказаться и наличие сразу нескольких очагов инфекционных (хронических!) заболеваний.

Анализ крови методом ИФА проводится для выявления:

• аскаридоза;
• описторхоза – острого или хронического;
• лямблиоза;
• токсоплазмоза.

Также при проведении исследования в организме пациента могут быть обнаружены острицы или амебы. Диагноз «лейшманиоз» и «трихинеллез» тоже нередко ставятся больным на основании данных анализа крови ИФА.

Подводим итог

Конечно, самостоятельно разобраться в данных теста очень трудно, поскольку во время этого процесса должны учитываться многочисленные факторы. Вредные привычки, наличие сопутствующих заболеваний, применение определенных групп медикаментозных препаратов – все это играет важную роль, и может повлиять на результаты, что и берется в расчет врачами при расшифровке результатов ИФА.

Однако, «осведомлен, значит, вооружен», поэтому каждому человеку важно знать особенности проведения и трактовки данных тех лабораторных исследований, которые ему назначает лечащий врач. И метод ИФА не является исключением!